دانشگاه علوم پزشکی ایران
Iran University of Medical Sciences

مطالب و پروتکل های آموزشی

 | تاریخ ارسال: ۱۳۹۶/۷/۱۸ | 
پروتکل تهیه محلول 4 درصد فرمالین در PBS
در بیشتر فرایندهای IHC/ICC برای فیکس کردن بافت از فیکساتیوهایی استفاده می شود که حاوی فرمالدهید هستند و پروتکل زیر تکنیک تهیه محلول فرمالدهیدی 4 درصد در PBS  می باشد.
نکته مهم: فرمالدهید سمی است. لطفا MSDS  را قبل از کار کردن با آن مطالعه نمایید. دستکش و عینک ایمنی باید استفاده شود و محلول را در داخل فوم هود تهیه نمایید.
لطفا قبل از شروع پروتکل را به دقت بخوانید.
   https://resources.rndsystems.com/images/site/protocol-8-thumb6630.jpg
 
مواد شیمیایی مورد نیاز:
. آب مقطر
. اسید کلریدریک رقیق (HCL)
. NaOH (1 N)
. پودر پارافرمالدهید
      1x PBS: 0.137 M NaCl, 0.05 M NaH2PO4, PH 7.4 .
 
وسایل مورد نیاز:
فیلتر
ظرف مخصوص تهیه پارافرمالدهید
دستکش و محافظ چشم
هات پلیط و همزن مغناطیسی
ترمومتر(حرارت سنج)
هود مناسب
 
فرایند آماده سازی:
برای تهیه پارافرمالدهید 4 درصد, ml 800 PBS 1X را در بشر ریخته و روی همزن زیر هود تحویه قرار می دهیم. محلول را تا دمای 60 درجه حرارت می دهیم. مواقب باشید که محلول نجوشد.
40 گرم پودر پارافرمالدهید را به PBS  حرارت دیده اضافه کنید.
پودر به سرعت در محلول حل نخواهد شد. با اضافه کردن یک قرص NaOH به وسیله پیپت محلول را شفاف کنید.
هنگامی که پارافرمالدهید حل شد, محلول باید خنک شده و فیلتر شود.
محلول را با PBS 1X  به یک لیتر برسانید.
PH را دوباره بررسی کنید و با اضافه کردن مقدار بسیار کمی HCL رقیق آن را به 6.9 برسانید. (گفته می شود اگر محلول اسیدی بود با اضافه کردن مقادیر کمی قلیا PH را تنظیم کنید.)
این محلول را می توان در دمای 2 تا 8 درجه تا یک ماه نگه داشت.
 
تفاوت بین پارافرمالدهید, فرمالدهید و فرمالین
 
https://resources.rndsystems.com/images/site/formaldehyde_structure6606.jpg
 
پارافرمالدهید (با نام شیمیایی پلی اکسی متیلن) پودر پلیمریزه ی فرمالدهید است که به تنهایی نمی تواند عمل فیکس کردن بافت را انجام دهد. برای اینکه به عنوان ماده فیکساتیو بافتی بتوان از آن استفاده کرد, پارافرمالدهید باید در آب گرم حل شده و به محلول فرمالدهید تبدیل گردد.
فرمالین یک محلول فرمالدهیدی اشباع شده در آب است(درصد وزنی 37 و درصد حمی 40) که حاوی 10 الی 15 درصد متانول است. متانول برای کاستن سرعت پلیمریزاسیون به فرمالدهید اضافه می شود که از قدرت فیکس کنندگس فرمالین می کاهد. فرمالین می تواند از پارافرمالدهید پودری در شکل بدون الکل ساخته شود.
تهیه و ترجمه: لیلا آریان
زیر نظر: دکتر فریناز نصیری نژاد
 
 

دفعات مشاهده: 175 بار   |   دفعات چاپ: 19 بار   |   دفعات ارسال به دیگران: 0 بار   |   0 نظر